免疫组化实验步骤：

1．包埋好的标本用切片机切石蜡切片3um

2．经60℃烘片1小时

3．二甲苯Ⅰ脱蜡10分钟

4．二甲苯Ⅱ脱蜡10分钟

5．梯度酒精复水：100%酒精5分钟，100%酒精5分钟，95%酒精5分钟，80%酒精5分钟，自来水冲洗 5分钟

6．进行抗原修复：将切片置于0.1mol/L且ph=6.0的枸橼酸液修复液中，沸水浴20分钟，停止加热后自然冷却20-30分钟

7. 用PBS 3分钟3次，组画笔画圈，滴加双氧水，孵育20min

8． 用PBS 3分钟3次，滴加封闭血清封闭1h

9．甩干 ，滴加适宜浓度的一抗置湿盒中4℃孵育过夜

10．用PBS 3分钟×5次洗去一抗

11．甩干，滴加二抗室温置孵育盒中孵育1小时（注意二抗种属，夏季30min，冬季1h）

12．用PBS 3分钟×5次洗去二抗

13．甩干，滴加DAB 显色，水冲

14．苏木素染核5min (新配置的苏木素视情况而定)

15.流水冲洗多余的苏木素，分化液中分化1秒

16.流水冲洗5min

17.梯度酒精复水：80%酒精5分钟，95%酒精5分钟，100%酒精5分钟，100%酒精5分钟，二甲苯Ⅱ透明5min，二甲苯Ⅰ透明5min（如为完全透明，可适当延长时间）

18.用中性树胶封片

19.镜检