免疫组化实验步骤:
1.包埋好的标本用切片机切石蜡切片3um
2.经60℃烘片1小时
3.二甲苯Ⅰ脱蜡10分钟
4.二甲苯Ⅱ脱蜡10分钟
5.梯度酒精复水:100%酒精5分钟,100%酒精5分钟,95%酒精5分钟,80%酒精5分钟,自来水冲洗 5分钟
6.进行抗原修复:将切片置于0.1mol/L且ph=6.0的枸橼酸液修复液中,沸水浴20分钟,停止加热后自然冷却20-30分钟
7. 用PBS 3分钟3次,组画笔画圈,滴加双氧水,孵育20min
8. 用PBS 3分钟3次,滴加封闭血清封闭1h
9.甩干 ,滴加适宜浓度的一抗置湿盒中4℃孵育过夜
10.用PBS 3分钟×5次洗去一抗
11.甩干,滴加二抗室温置孵育盒中孵育1小时(注意二抗种属,夏季30min,冬季1h)
12.用PBS 3分钟×5次洗去二抗
13.甩干,滴加DAB 显色,水冲
14.苏木素染核5min (新配置的苏木素视情况而定)
15.流水冲洗多余的苏木素,分化液中分化1秒
16.流水冲洗5min
17.梯度酒精复水:80%酒精5分钟,95%酒精5分钟,100%酒精5分钟,100%酒精5分钟,二甲苯Ⅱ透明5min,二甲苯Ⅰ透明5min(如为完全透明,可适当延长时间)
18.用中性树胶封片
19.镜检