细胞转染
细胞转染（Transfection）是指将DNA或者RNA导入真核细胞中的过程。转染的目的是产生重组蛋白，或特异性增强或抑制转染细胞中的基因表达。
根据导入的核酸存在于宿主细胞的时间长短，可以分为瞬转和稳转。
| 瞬转 |
稳转 |
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导入的DNA没有整合到基因组中，而是保留在细胞核上 |
导入的DNA整合到基因组中 |
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导入的遗传物质不传递到子代； 遗传改变只是暂时的 |
导入的遗传物质能够代代相传；遗传改变是永久的 |
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不需要选择性筛选 |
需要选择性筛选出稳定转染的细胞 |
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DNA载体和RNA都可用于瞬时转染 |
只有DNA载体可用于稳定转染；RNA本身不能稳定地导入细胞中 |
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导入的遗传物质的高拷贝数导致高水平的蛋白质表达。 |
单拷贝数或低拷贝数的稳定整合的DNA导致较低水平的蛋白质表达。 |
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通常在转染后24-96小时内收获细胞。 |
需要2-3周的时间筛选出稳定转染的细胞克隆。 |
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通常不适合使用具有诱导型启动子的载体的研究。 |
适用于使用带有诱导型启动子的载体的研究。 |
1、材料
293T细胞、MyoD表达质粒和EGFP表达质粒、DMEM培养基、链霉素/青霉素(双抗)、FCS(小牛血清)、PBS(磷酸盐缓冲溶液)、胰酶/EDTA消化液、转染试剂(TransFast)
2、器材
20ul/200ul/1ml微量移液器和Tip头酒精灯、废液缸、血球计数板、涡旋振荡器、恒温水浴箱、台式离心机、35mm培养皿、转染管、15ml离心管、观察用倒置显微镜荧光显微镜和CCD
3、实验步骤
细胞传代
(1)试验准备：200ul/1mlTip头各一盒(以上物品均需高压灭菌)，酒精棉球，废液缸，试管架，微量移液器，记号笔，培养皿，离心管。
(2)弃掉培养皿中的培养基，用1ml的PBS溶液洗涤两次。
(3)用Tip头加入1mlTrypsin液，消化1分钟(37。C，5%CO2)。用手轻拍培养瓶壁，观察到细胞完全从壁上脱落下来为止。
(4)加入1ml的含血清培养基终止反应。
(5)用Tip头多次吹吸，使细胞完全分散开。
(6)将培养液装入离心管中，1000rpm离心5min。
(7)用培养液重悬细胞，细胞计数后选择0.8X106个细胞加入一个35mm培养皿。
(8)将合适体积完全培养液加入离心管中，混匀细胞后轻轻加入培养皿中，使其均匀分布。
(9)将培养皿转入CO2培养箱中培养，第二天转染。
